Bộ phim Người Nhện đưa ta đến với hành trình biến đổi đầy ngoạn mục của Peter Parker, một cậu học sinh trung học bình thường. Cuộc đời anh bất ngờ thay đổi hoàn toàn sau khi bị cắn bởi một con nhện biến đổi gen trong chuyến tham quan khoa học. Vết cắn tưởng chừng như vô hại này lại mang đến cho Peter những khả năng phi thường, biến anh trở thành Người Nhện - một siêu anh hùng mạnh mẽ và đầy trách nhiệm....

Peter Parker có được tình yêu của Mary Jane nhưng sự nghiệp vẫn lận đận. Hạnh phúc ngắn ngủi khi bộ trang phục Người Nhện của anh bỗng chuyển sang màu đen, mang lại sức mạnh phi thường nhưng cũng thay đổi tính cách Peter. Bị chi phối bởi bộ trang phục, Peter trở nên ngạo mạn, khơi dậy những cảm xúc tiêu cực như nỗi đau và thù hận....

Sau những sự kiện xảy ra trong 2 năm của Người Nhện, Peter Parker đang vật lộn để cân bằng cuộc sống của mình với tư cách là một sinh viên đại học và Người Nhện. Anh phải đối mặt với những khó khăn về tài chính, những mâu thuẫn trong tình cảm và những thách thức trong học tập. Vì cái chết của người cha Harry - bạn thân của Peter, mối quan hệ của họ dần trở nên rắc rối. Bên cạnh những mâu thuẫn nội tâm, Peter còn phải đối mặt với một kẻ thù mới nguy hiểm - Giáo sư Otto Octavius, nhà khoa học tài ba nhưng tham vọng của tập đoàn Oscorp....